Immune defence reactions in freshwater crayfish, Cellular components

Signalkräftan, Pacifastacus leniusculus, är en väletablerad modell för att studera immunsystemet hos ryggradslösa djur. Många viktiga upptäckter har gjorts hos denna art, bland annat relaterade till koaguleringsreaktionen, hematopoiesis, det prophenoloxidasaktiverande systemet, funktionerna hos kräftdjurs immunceller och patogenigenkänning. I denna avhandling lämnas ett litet bidrag till detta arbete, med fokus på kräftans cellulära försvarsreaktioner på svampmönsterigenkänningsproteinet beta-1,3,-glukaner, och på en oomycet, typen av patogen som orsakar kräftpest. Genom att kartlägga den proteomiska reaktionen i hemocyterna till beta-1,3,-glukan, och sedan studera några av de identifierade proteinerna mer i detalj, för det oss närmare att förstå hur dessa djur försvarar sig mot svampinfektioner utan att förlita sig på adaptiv immunitet. En proteomisk screening av hemocyter utfördes efter en injektion av laminarin, en beta-1,3,-glukan, och jämfördes med svaret på en saltlösningsinjektion och icke-injicerade kontroller. Jämfört med båda kontrollgrupperna var tre proteiner specifika för laminaringruppen: en glycinrik peptid, en proteinashämmare av Kazal-typ och ett förmodat kitinbindande protein; ingen av dem hade beskrivits tidigare. Tre andra proteiner uppreglerades i både saltlösningen och laminaringruppen: ett lysozym av ryggradslösa djur (i-typ), ett crustin och maskerad. Den glycinrika peptiden och lysozymet av i-typ undersöktes båda i detalj för deras potentiella funktioner i immun- och sårsvar. Peptiden visade sig uttryckas i flera vävnader och har en specifik aktivitet mot kräftpestpatogenen Aphanomyces astaci, utan effekt mot några andra testade arter av oomyceter, svampar eller bakterier. Lysozymet av i-typ (Pl-ilys), som saknade muramidasaktivitet och därför sannolikt inte var inblandat i antibakteriellt försvar, visade sig kunna destabilisera blodproppar som bildas från kräftans koaguleringsprotein och transglutaminas. Detta resultat indikerade en möjlig ny funktion för muramidas-deficienta lysozymer av i-typ i kräftdjur. En encellig RNA-sekvenseringsstudie genomfördes också för att undersöka typerna av blodkroppar och hema-topoetiska stamceller i P. leniusculus, vars resultat visar att det finns flera potentiella undertyper bland granulära, semi-granulära, hyalina och hematopoetiska celler.